三聚氰胺的检测方法
看了几个三聚氰胺的检测方法，都有些类似，翻译了一个用LC/MS/MS检测的，原文在这里。
下面是整个PDF的部分，基本上把主要的都翻译成了中文。这个方法和FDA的方法大致类似，只是FDA的方法比较老，而这个方法是FERN(food emergency response network)，应该翻译成食品紧急反应网吧，在2006年12月份做的一个检测方法。比较新。所以翻译。
最近我正研究测定三聚氰胺，比较难测，但是还不至于到不可测定的地步。今天看了新闻，和我之前想的一样，是收奶过程中引入的三聚氰胺。好了，看正文吧。有液质联机的幸福了。
文章分为以下几个部分：
A 介绍
B 设备
C 试剂和溶液
D 标准物
E 样品准备
F 分析程序
G 筛选标准
H 安全信息和预防措施
I 质量评估计划
K 附件
L 许可和授权
下面就是翻译的正文了。
A 介绍
1、原理
三聚氰胺用乙腈和水混合从肌肉组织提取，提取物通过与二氯甲烷液液交换，之后通过固相萃取柱净化，用5%氢氧化铵/甲醇溶液洗脱，蒸发干燥，和内标重溶50%乙腈/水溶液。通过LC/MS/MS(液相色谱/质谱/质谱)分析。
2、适用范围
本方法适用于甄选三聚氰胺含量大于等于50ppb得猪肉和家禽肉。
3、结构
B 设备
注意：以下所列，可用相当设备替换。
1、 器皿
a 分析天平，0.1mg灵敏度，型号味A120S，Sartorious公司
b 上皿式天平，0.01g灵敏度，Mettler公司
c 带15ml离心管的离心机，国际设备公司
d 带50ml离心管的离心机，同上
f 离心管 15ml玻璃，一次性，上端螺纹，Kimble公司，货号73785
g 离心管 玻璃，一次性，15ml，16×100mm，Kimble公司，货号73500 16100
h A类量筒，25ml，100ml，500ml
i 均质机
j 可调移液器，100ul~10ml，Eppendorf
k 1ml注射器
l 氮吹仪
m 巴斯德习惯
n 反复吸管-大容量液体移液器(repipetters-bottle top dispensers)，0~25ml和1~10ml有机型
o 混合气，水平震动，2速 Eberbach公司
p 固相萃取柱 Strata X-C, 60mg,，3ml，Phenomenex公司
q 药匙，不锈钢
r 注射瓶，Teflon涂层
s 3ml，一次性注射器
t 注射器过滤微孔滤膜，0.45um
u 试管架
v 真空多支管设备，固相萃取柱用
w A类容量瓶 50ml、1L
x 漩涡振荡器，可调速度
2、 设备
a HPLC Waters Alliance 2695
b 质谱，Waters 串联四级杆
c 色谱柱，Phenomenex SynergiTM 反相柱(150×4.6mm；4um粒径)
C 试剂和溶液
注意：下面所列试剂和溶液可被相当试剂替代。
1、试剂
a 乙酸，质谱纯
b 乙腈， 色谱纯
c 乙酸铵，质谱纯
d 氢氧化胺，30%
e 盐酸
f 甲醇，色谱纯
g 二氯甲烷，色谱纯
h 超纯水，10M欧姆。
2、溶液
a 乙腈水混合液，体积比1：1
b 冲洗溶液，乙腈和水各半，无需精确
d 1N HCl
d 0.1N HCl
e 5% 氢氧化胺甲醇溶液
f 流动相A（25mM乙酸铵/25mM乙酸溶于水中）：
D标准
注意：注意：下面所列试剂和溶液可被相当试剂替代。
1、 来源
a 三聚氰胺，货号M2659，Aldrich公司
b 15N3三聚氰胺（内标），货号IN5451,ICON服务
2、储备液
a 三聚氰胺储备液,100ug/ml
b三聚氰胺工作液,1ug/ml
c 15N3三聚氰胺内标
d 校正曲线
浓度 等同单位 三聚氰胺工作液（1ug/ml） 定容体积 稀释液，乙腈水溶液(1:1, V/V)
0ng/ml 0ppb 500ul 500ul 500ul
125ng/ml 25ppb 125ul 500ul 375ul
250ng/ml 50ppb 250ul 500ul 250ul
500ng/ml 100ppb 500ul 500ul 0ul
2、 储存和稳定性
储存于2-8℃，稳定性未测试
E 样品准备
肌肉样品取出多余脂肪后，切成小块，使用食品匀浆机粉碎。将粉碎样品转移到塑料袋中，储存在零下20℃。部分溶解样品优先分析。
F 分析程序
注意：避免塑料接触。
1、 肉样准备
a 称5.00±0.05g样本，放入50ml离心管中。同时做空白。
b 加入250ul的1ul/ml三聚氰胺工作液，作为50ppb的阳性对照。
c 加入25ml的乙腈水混合液(1:1, V/V)。
d 高速匀浆30s~60s。
e 3500g离心10分钟
f 吸取5ml的提取液到50ml玻璃离心管中
g 加110ul的1N的HCL，旋涡振荡混合
h 加10ml的二氯甲烷
i震荡2min
j 3500g离心10分钟，或静止分层
k，弃去上层水层
l 加2.5ml到50ml到上述管中
m震荡2分钟
n 3500g离心10min，或静止分层
o小心除去上层
p拧紧盖，旋涡振荡10s
q 3500g离心10分钟
r清洁spe用多支路萃取器
s用5m甲醇和水预洗SPE柱
t将样品加入SPE柱
u用0.1N的HCl 2ml，1ml甲醇洗柱，弃去清洗液
v 抽真空1min
w 用5ml，浓度5%得氢氧化胺/甲醇溶液淋洗柱子，收集淋洗液与试管中
x 清洗氮吹仪
y 50~60℃吹干
z 加入100ul的乙腈水溶液和100ul的内标工作液
aa 漩涡震荡样品，超声至少1min，以全部溶解残余物
bb 过0.45滤膜，放到样品瓶中，待测。
2、 仪器设置
注意：下面仪器参数可能是最优的。
a HPLC条件
Ⅰ 流动相A：25mM的乙酸铵/25mM的乙酸的水溶液
Ⅱ 流动相B：乙腈
Ⅲ 流动相C： 甲醇
Ⅳ 流速：0.5ml/ml
Ⅴ 梯度
时间，分钟 %A %B %C
0.0 80 15 5
5.0 30 65 5
5.1 5 90 5
7.0 5 90 5
7.1 80 15 5
12.0 80 15 5
Ⅵ 进样量：50ul
Ⅶ 柱温：25℃
b 接口条件
Ⅰ 极性：正
Ⅱ 离子源：EI
Ⅲ 源温度：125℃
Ⅳ 脱溶剂温度：450℃
Ⅴ进样锥气体流速：20L/hour
Ⅵ 脱溶剂气流速: 900L/hour
质谱多反应监测参数：
Ⅰ Resolution Q1 &Q3 Unit
Ⅱ 锥形电压： 35V
Ⅲ Dwell time: 0.2sec
Ⅳ 三聚氰胺跃迁：
(a) m/z 127→85 27eV碰撞电压
(b) m/z 127→68 17eV碰撞电压
Ⅴ 15N3三聚氰胺跃迁
(a) m/z 130→87 17eV碰撞电压
样品色谱图见原文
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