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梯度洗脱需要注意到问题

2007年11月13日

梯度洗脱,是分离难分离物质的常用手段—-这句话怎么这么难听?其中有些问题是必须要注意到,因为会损伤色谱柱和色谱的流动池或检测池,这都是色谱仪器的死穴。有些资料整理自网络,有些事工作的总结,我也分不清彼此,属于水乳交融你中有我我中有你的情况。200602141108355y

1、何为空白梯度洗脱

梯度洗脱由于是两种流动相随时间变化,即使在优秀的分析匠、在性能卓越的色谱仪都不可能出现非常好的基线,这就要求做空白梯度洗脱。啥叫空白?不用我告诉你吧,而取巧的办法是进一针流动相,看看基线中的杂峰。不要像某些人一样,看到峰就故作明白的说:“呀!鬼峰”经常有这类SB在我身边晃来晃去,然后你要接着问要探讨一下的时候,就以沉默对抗无知。我虽然没查过鬼峰的概念,但是也知道,莫名其妙、偶尔出现、具有鬼的特点的峰,才能叫鬼峰,基线上的峰你鬼峰个头啊!

2、要注意溶剂的互溶性

这是大家经常忽略的问题,而这个问题的严重性还很高,严重了直接把色谱柱给你堵了。到时候那真就叫天天不应,叫地地不灵了。比如说有些溶剂在一定的比例内互溶,超出一定的范围后就不会互溶。例如:乙腈和1mol/L的醋酸铵(pH5.16)做梯度洗脱,乙腈含量超过70%时就会出现不溶,甲醇和已烷混合,甲醇含量高于30%时就会分层等。当有机溶剂和缓冲溶液混合时还可能析出盐的结晶体,尤其使用磷酸盐时需特别小心。所以,掌握,做梯度洗脱先要了解流动相当互溶性,如果使用比例互溶的流动相,就更应该注意这个问题,不要自作主张胡乱更换流动相当比例。没准你轻轻鼠标一点,就结束色谱柱的大好钱途呢。

3、试剂的纯度

梯度洗脱要想保证好的重现性,溶剂的纯度要求更高,脱气在这里也成为了必须保质保量完成的任务,因为有些溶剂互溶的时候,脱气不好会产生气泡。

4、试剂的黏度

做梯度洗脱的同志,会发现压力波动范围变大,不要大惊小怪,由于溶剂黏度不同,当变化较快的时候,肯定会出现压力波动现象。比如用醋酸溶液和乙腈作为流动相,由于乙腈的黏度小于醋酸溶液,因此当乙腈比例提高时,压力会下降。还有个例子,纯水或甲醇的粘度都比较小,但是当二者以相近的比例混合时粘度会增大很多,此时的柱压是纯水或甲醇为流动相时的两倍。当然,不要让柱压超过输液泵或色谱柱所能承受的最大压力。
5、色谱柱再生

再生这个词用在这里似乎有些不妥,准确的说法是使色谱柱恢复到初始的状态。需让10~30倍柱容积的初始流动相流经色谱柱,使固定相与初始流动相达到完全平衡!

好了,就说这些吧!

分类: 仪器那点事 标签:
  1. 2007年11月14日00:03 | #1

    很专业,不知道食品安全检测是否是经常性的工作?是否有私人公司从事食品安全检测的可能?

    目前为经常性工作,不仅仅食品安全相关,所有能用液谱做的工作,我都做,我只能说做了一些。
    私人公司从事食品安全检测的问题,我也想过。我认为非常可能,也非常有市场,因为目前国家指定的检测中心收费过高,各家食品厂正在是否建立自己的分析测试中心而苦恼,建立了,需要人员培训等一系列工作;不建立,只能眼睁睁看着被人掐脖子办事。而且对于国内生产半成品的企业,常常拿指标说话。他们需要低廉的检测中心的心情非常迫切。他们不愿意建立自己的检测中心的主要原因是,没人、没钱。我曾经给企业培训过很多检测人员。因为没有检测的数量跟着,因此很难保证检测的准确性。

  1. 2007年12月1日10:57 | #1
  2. 2011年12月1日15:19 | #2
  3. 2011年12月5日02:39 | #3
  4. 2011年12月6日13:02 | #4
  5. 2011年12月6日22:07 | #5
  6. 2011年12月7日08:36 | #6
  7. 2011年12月11日20:19 | #7
  8. 2011年12月12日12:40 | #8
  9. 2011年12月12日15:28 | #9
  10. 2011年12月13日09:30 | #10
  11. 2011年12月14日05:55 | #11
  12. 2011年12月15日19:11 | #12
  13. 2011年12月16日07:39 | #13
  14. 2011年12月17日08:11 | #14
  15. 2011年12月17日17:12 | #15
  16. 2011年12月18日02:37 | #16
  17. 2011年12月19日22:21 | #17
  18. 2011年12月25日16:53 | #18
  19. 2011年12月25日21:21 | #19
  20. 2011年12月26日18:08 | #20
  21. 2011年12月27日01:49 | #21
  22. 2012年1月2日12:12 | #22
  23. 2012年1月5日05:36 | #23
  24. 2012年1月5日17:56 | #24
  25. 2012年1月9日14:15 | #25
  26. 2012年1月9日16:48 | #26
  27. 2012年1月11日09:38 | #27
  28. 2012年1月11日11:54 | #28
  29. 2012年1月12日06:04 | #29
  30. 2012年1月14日15:26 | #30
  31. 2012年1月17日13:22 | #31
  32. 2012年1月20日23:42 | #32
  33. 2012年1月21日21:52 | #33
  34. 2012年1月22日20:09 | #34
  35. 2012年1月28日05:25 | #35
  36. 2012年1月30日17:38 | #36
  37. 2012年1月31日22:02 | #37
  38. 2012年2月3日10:11 | #38
  39. 2012年2月6日00:55 | #39
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