好久没有写有关仪器的东西了。
重新安装ABI的7500工作站后的校正
我们的Real-time PCR 7500工作站的硬盘坏掉了。拿出修更换一个一盘回来，确找不到工作站的安装盘，到网络上下载一个新版本，居然不能用。联系工程师邮寄一个过来。后来又到林大借了校正试剂盒来，开始做重新安装机器要做的校正过程。校正必须用ABI公司的校正试剂盒，7300和7500的通用。简单来讲，校正分为三个步骤，第一步，就是做ROI校正，ROI是Region of Interest的缩写，目的是校正每一个反应孔内的荧光强度，和每个荧光孔的位置，校正后，这些数据会记录在软件里。因此，如果更换硬盘或者重装工作站，又没有ROI校正平板的话，把原来机器里面的参数设置到新的软件里，就可以不用做ROI校正。第二步，做背景校正，也就是background calibration，也要用到背景校正平板，在第二部中，最后是用ROI校正板做光路校正。第三步，就是进行各种荧光的校正了。如果是新安装工作站，可以用安装向导来做校正，这样简单，工作量小，而且效果好，只是在做背景校正的时候，要在软件的启动参数里加上”/serverce”进入软件的服务模式，输入一些数据，这个数据还是问工程师比较把握。然后把启动参数去掉，用向导进行校正。
这里有校正的具体步骤，但是不是重新安装工作站的校正步骤，因此才有此文。
安捷伦工作站的缺点避免
安捷伦工作站有很多设计问题，不人性化，而且启动速度慢，操作复杂，功能少。一个最常见也是最头疼的问题是，每次工作站会保存上一次的仪器条件，当在新的测定工作中启动工作站，工作站会自动把上次的仪器参数传给仪器，这对于我这种经常更换色谱柱，改换仪器条件的人来说，非常不习惯，和安捷伦的工程师沟通，他们只是说这是工作站设计问题。为了避免这个问题。在不抛弃安捷伦工作站的情况下（安捷伦的机器在戴安的变色龙，breaze里面都可以运行），只能采取如下两条办法：
1、利用脱机工作站
不要开仪器，先打开电脑，打开脱机工作站，调出你想用的方法，或者编辑好你的新方法，保存，然后关闭工作站。然后在做正常的顺序，开仪器，开工作站。这样就不会出现问题了。
2、删除config文件
推荐上一种操作办法，毕竟这有误删除的危险。每次测定完成后，到仪器工作站的目录下，删除config文件，这样下次启动工作站的时候，它会自动调用默认的方法，用于建立新的方法。
绝大多数阅读我博客的人大概不知道这篇题目的含义，如果不知道，就不要看了。
我下面写的也不是很专业，从自己的记忆中大致如此吧，应该错误很少。如果要想更好的理解下面的文字，你至少还要知道，何为正相色谱柱，何为反相色谱柱，当然，了解什么是高效液相色谱主之类的废话我这里就不提了。
你要知道这C8和C18是什么物质，或者他们代表什么。他们都是色谱填料的一种，C8代表该化合物由8个碳组成，c18同理。色谱柱填料的特点是标志色谱柱的重要方面，你常常会看到在C8或C18的前面，有些其他的名称，比如hypersil之类的，他们表示在C8或C18的基础上，进行了一些该进，因此更适合于某类特定化合物的分析。从表面上看，C18和C8的区别就是C18比C8少了10个碳原子，而我们要讨论的区别，就是差别这十个碳原子带来的。这反映了物质决定意识的基本哲学原理，呵呵。
其实谈到色谱，必须要搞清楚的一个就是极性，因为色谱分离的一个重要原理就是“相似相容”。那我们就先谈谈极性。
C8和C18都是反相色谱柱的一种，适用于分析弱极性的物质，而C8在弱极性较强的一侧，C18在极性较弱的一侧。也就是说，C8适合分析弱极性物质里极性稍强的一类物质，C18适合分析弱极性物质里极性更弱的物质。这是他们极性上的差别，但是差别并不是特别明显，一般能用C8分析的物质，在C18上也能分离。这是因为，后者比前者的保留特性更好一些，这似乎和色谱柱填料的结构关系更为密切。
在让我们谈谈空间位阻的问题，也许由于C18比C8的碳链更长，因此带来更好的保留特性。因此C8就更适合分析大分子类的物质，比如一些球蛋白等，都用C8和缓冲盐洗脱剂来配合使用。相反，分子量较小的物质，经常用C18来进行分析和分离。
另外，你还会经常在C18前面看到“ODS”的字样，ODS是英文octadecyl silane的所写，意思是十八(烷)基硅烷，是以硅胶为基质键合的C18填料，由于大部分的C18柱都是硅胶基质，因此有时你还会看到色谱柱上只标称二者之一。其中以ODS居多。有时你还会看到ODS-x，x是不同的数字，这个x虽然是数字，但是不同厂家的产品代表的含义不同，一般以含碳量区分，但这也不是绝对的。有时还可能看到RP-18或RP-8，RP-18和C18意义基本一致，但是不同的厂家有不同的规定。
C8和C18虽然有这些差别，但是使用和维护的办法都是一样的。采用反相色谱柱的维护办法就可以了。
1938年诺贝尔化学奖由德籍奧地利化學家 R.Kuhn获得，他就是采用色谱法对维生素和胡萝卜素进行分离分析和结构分析而获奖，也正因为他的出色工作，色谱分析法名声大振，迅速为各国科学 家们所注目，广泛被采用起来。每当读到色谱书籍的时候，总会看到很简单的介绍发明者维茨特，简单到一般只有这么一句话：
色谱法由M.S.Tswett发现。
这引起了我的好奇，M.S.Tswett到底是怎样一个人呢？终于在1970年的色谱杂志上，发现了一篇介绍M.S.Tswett的文章，翻译下来，和大家共享。
在科学史上，有些科学发现流落民间无人问津，直到其他科学家在论文中提及才又大放异彩。这样的事情司空见惯。20世纪早期的麦克海尔.塞蒙诺维奇.维茨特(Mikhail Semenovich Tswett)就是如此，那时维茨特是一个年轻、谦虚且勤劳的的俄国植物学家(botanist)。他的发现改变了现代分析化学并且导致化学过程中控制和自动概念的形成。不幸的是，几乎没有人知道他。
他出生在1872年5月14日，意大利北部的一个小村庄Astia。他的父亲塞蒙.尼古拉耶维奇.维茨特(Semen Nikolayevich Twsett)在当地任要职，母亲是意大利人，叫玛利亚 多洛兹。从名字上看，维茨特属于东正教。他在瑞士受教育，在那里他先进入洛桑的Galliard’s 学院，然后去了日内瓦的圣安东尼体育学院，1891年，他进入日内瓦大学自然科学系学习。他对植物、化学、物理都很感兴趣。他大多数时间都在植物学实验室进行他的第一个研究，这个研究后来获得了大学的奖学金。就在这个实验室，维茨特完成了他的关于细胞生理学的博士论文，并在1896年毕业。同年，他移民到俄罗斯，先在辛菲罗波尔待了半年，然后到彼得堡的赖斯格来福特的生物实验室工作。
在俄罗斯的第一年，维茨特很不如意，他的博士学位没什么用处，他不得不为了学位而学习，在他给日内瓦朋友的信中，他抱怨生活很困难以及俄罗斯社会对他的指责。他甚至计划离开俄罗斯，但是最后来时留在了那里，勤奋的工作。
在彼得堡，维茨特结识了很多著名的植物学家并结下了友谊，尤其和Academician A.S. Famistsin熟悉，他在Famistsin的实验室作为编外人员工作。1900年，在几位杰出科学家的推荐下，维茨特获得彼得堡自然科学家协会的会员资格。1901年，维茨特完成了他的硕士论文，题目是“叶绿素的物理和化学研究， 试验和分析”9月21日，维茨特通过硕士入学考试后，在喀山大学介绍了他的论文，在这次演讲中，充分显现了维茨特的演讲才华。
1902年1月，维茨特到了华沙，担任编外实验室助手，之后作为植物解剖和生理的指导老师，然后成为一名副教授。维茨特在华沙待了14年，发现色谱法就是在这里时间里，尽管色谱方法的基本方法在俄罗斯攻读硕士论文中就已经提到。1907年，维茨特成为华沙兽医研究所的植物和农业的审稿人，1908年成为华沙多种技术研究所化学和矿产部门的植物和微生物审稿人。在这里，维茨特遇到了海琳娜 亚历山大维纳 图塞维奇，并在1908年底结婚。
在华沙的头几年，对于一眼年轻的研究者来讲，维茨特是极富创造力的。在彼得堡的时候，维茨特就给生命中最核心的问题给予了特殊的关注，那就是神秘的叶绿素。
他一直坚持寻找分离这种最复杂混合物的物理方法，他坚信，叶绿素不是一种简单的物质。
维茨特长年累月的进行了大量试验。而方法就在那里，非常的简单。简单是方法最大的优点，但也正因为简单，这个方法很不被同时代的研究人员看好。这个方法简单到不能带来任何惊喜，也简单到没有人在维茨特之前发现它，尽管很多人差点就发现了这种方法。
经过两周的研究，我们终于开发并验证了高效液相三聚氰胺分析包。
分析包包括：
1、1根定量色谱柱，价格2700元，可分析300-500样本；1根定性柱(选配)，价格2300元；
2、流动相，1.25L，5元；
3、前处理试剂，1.25L，5元；
4、0.25um滤膜，50个/包，20元。
分析包所需仪器及设备：
1、具备紫外检测器的液相色谱；
2、10000r/min的离心机，低温离心机最好；
3、普通超声清洗器。
分析包需要的玻璃器皿：
1、150mll烧杯若干；
2、5ml、10ml容量瓶若干；
3、移液器1ml、2ml、5ml、10ml若干；
4、三角烧瓶若干。
方法介绍：本方法非常简便，使用前处理试剂溶解样品，超声5钟，1500转离心2钟，取上清，10000离心2钟（如采用常规离心机，可用干冰对离心机喷雾或者用冰块降温），吸取上清液，过膜，上机。大约20分钟一个样品。每样成本15元以下，包括色谱柱损耗。
方法包扩展：
本方法包除可以测定三聚氰胺外，还可测定尿素、皮革蛋白粉，地沟油。我们正在努力研究其他可能掺杂到牛奶中的物质的测定办法。
漏气？气相色谱可受不了这个。今天接到电话，说怎么快速检查GC的气路是否漏气？我第一个反应是，你怎么不问工程师？他无奈的说，今天周日。
怎么检查气路是否漏气？说是实话，我只拿肥皂泡检查过，可怎么快速呢？朋友单位的GC离气瓶室还挺远，而且气路还部分包在装修里了。还问我色谱内部气路是否漏气？
等一下回电话，我只好如此回答。
上网搜，没找到，到实验室看看我们的气路，突然间灵光一闪，哈哈，有了。压力表！
方法真是太简单不过了，把气瓶打开，调高压力，当然要注意你管路的耐压程度，不过鉴于GC的气路都是金属的，应该没什么问题，当然你也别调的太高，稳定后，关闭总阀，一定好关死。此时，把你的小耳朵贴到管路上，堵上你另外一个耳朵，找一个安静的部分，仔细听听，如果漏气，你会听到，如果没有听到，把气路中的压力调低，怎么调低？把气路中的气体放干净，然后重新打开总阀，把压力调小一点，关闭总阀，标记好低压表指针的位置，去排除其他故障吧，或者点根烟，然后回头看看压力表指针变没变？变了，那肯定是漏气了。
问题解决。
不过很久以前，曾经听到朋友说气体用的快，嗯，那可能是微弱渗气所致，按照上法过夜试验一下，不久知道了吗？
回头查了查Agilent的手册，在安装那里看到下面的内容，和我用的方法很类似，呵呵，应该说我的方法和Agilent的类似，留此待用。
外气路的检漏
把主机气路面板上载气，氢气，空气的阀旋钮关闭，然后开启各路钢瓶的高压阀，调节减压阀上低压表输出压力，使载气，空气压力为0.35~0.6Mpa（约3.5~6.0kg/cm3），氢气压力为0.2~0.35 Mpa。然后关闭高压阀，此时减压阀上低压表指示值不应下降，如下降，则说明连接气路中有漏，应予排除。
色谱仪气路气密性检查
打开色谱柱箱盖，把柱子从检测器上拆下，将柱口堵死，然后开启载气流路，调低压输出压力为0.35~0.6Mpa，打开主机面板上的载气旋钮，此时压力表应有指示。最后将载气旋钮关闭，半小时内其柱前压力指示值不应有下降，若有下降则有漏，应予排除。
若是主机内气路有漏，则拆下主机有关侧板，用肥皂水（最好是十二烷基磺酸钠溶液）逐个接头检漏（氢，空气也可如此检漏），最后将肥皂水擦干。
当然，此法只能知道漏不漏，还不能知道那里漏。
什么样的司机是个好司机？一种是开自己熟悉的车开的很好，还有一种是无论开熟悉的车还是不熟悉车都开的很好。当然也许好的程度上好有点不同。至于到底那种司机更符合你心目中的好司机，那就是婆说婆有理，公说公有理了。
做仪器分析呢？是只熟悉自己摆弄的那台仪器，还是触类旁通，懂得不同类型的仪器更为优秀？下面总结了一些，从你熟悉的色谱仪器，换到你不熟悉的色谱仪器，尤其是不同品牌，不同实验室的仪器应该注意的问题。
我就不说要注意仪器型号之类的废话了，我说点更有价值的。
1、检测器配置
这也有点像废话，但是这还真忽略不得，色谱仪器检测器就那几类，开别人的机器前，要注意机器上都安装了那些检测器。
2、看懂色谱柱
这似乎和更更换仪器没什么关系，但是因为一般工作中，只熟悉集中色谱柱的标志方法，所以更换仪器后要看明白色谱柱说明书。这在平时的工作中就应该注意。
3、气路、电路、流路的连接方式
看似简单的东西，往往会给你造成大麻烦和措手不及。知道各个管路的内容，了解电力配置，对你安全试验很重要。
3、了解个步骤在软件中的名称
其实色谱软件均大同小异，不同的是不同软件对色谱仪器各个部件的称呼不同，从而导致设置的不同，还有就是软件部分的称呼不同，比如，Angilen把编辑样品标号的地方叫序列，而Waters叫样品方法。除此之外，还要注意如下信息：样品进样针深度的定义；进样盘的定义和位置；自动进样针的容量及最小进样量；色谱柱的最低最高柱温；色谱柱的压力限制。如此这些。
4、了解实验室废液、垃圾桶都在什么位置
这看似和试验无关，可如果你不动声色的先把这些准备好，然后在开通机器做实验，即使做过多少年的色谱高手，也会对你刮目相看。